问题详情:
为增加油菜种子的含油量,研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连,导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种.
(1)从陆地棉基因文库中获取酶D基因,从拟南芥基因文库中获取转运肽基因,然后利用 技术分别进行扩增.
(2)如图1,选用图中的限制酶 处理两个基因后再用 酶处理,得到 (填图中字母)端相连的融合基因.
(3)将上述融合基因*入图2所示Ti质粒的T﹣DNA中,构建 并导入农杆菌中.将获得的农杆菌接种在含 的固体平板上培养得到单菌落,再利用液体培养基震荡培养,得到用于转化的浸染液.
(4)剪取油菜的叶片放入浸染液中一段时间,此过程的目的是 ,进一步筛选后获得转基因油菜.
(5)用DNA﹣RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了 (转录、翻译).
【回答】
解:(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物,采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因,从拟南芥基因文库中获取转运肽基因.
(2)在上述引物设计时,分别在引物中加入如图*所示酶的识别序列,这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后,得到A、D端相连的融合基因.
(3)将上述融合基因*入图乙所示Ti质粒的T﹣DNA中,构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中.将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落,再利用液体培养基震荡培养,可以得到用于转化的浸染液.
(4)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间,此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入受体细胞,进一步筛选后获得转基因油菜细胞.该细胞通过植物组织培养技术,可培育成转基因油菜植株.
(5)用DNA﹣RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了转录,产生了mRNA;用抗原﹣抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达.
故*为:
(1)PCR(聚合酶链式反应/多聚酶链式反应)
(2)ClaⅠDNA连接 A、D
(3)基因表达载体 四环素
(4)将目的基因导入受体细胞
(5)转录
知识点:生物技术的安全*和伦理问题
题型:填空题