问题详情：
植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含有半乳 糖醛*的多聚糖）等。研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下 图（neo 为新霉素抗*基因）。
（1）将该重组质粒成功导入受体细胞后，经培养，发现约有 50%的细胞能正常表达目的基因产物，原因是____________________________________________。通过①过程获得的重组质粒含有 4.9 kb 个碱基对，其中 manA 基因含有 1.8 kb 个碱基对。若用 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得 1.7 kb 和 3.2 kb 两种 DNA 片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得__________kb 长度两种的 DNA 片段。
（2）图 2 中，猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养 10 代以内的细胞，原因是_____________________，猪的卵母细胞一般要培养到__________期。
（3）在④过程的早期胚胎培养时，通常需要定期更换培养液，目的是______________________________________________，一般培养到__________阶段，可向受体移植。
（4）⑤过程前，通常需对受体母猪注*孕激素，对其进行__________处理。
【回答】
目的基因与质粒连接时，存在正向连接和反向连接两种重组质粒 3.5和1.4 保持正常的二倍体核型，遗传物质不变 MⅡ中（或“减数第二次*中”） 清除代谢废物（减少代谢废物对细胞的毒害，补充营养） 桑椹胚或囊胚 同期发情
【分析】
分析题图：①为基因表达载体的构建、②为将目的基因导入受体细胞、③为体细胞核移植、④为早期胚胎培养、⑤为胚胎移植。
【详解】
（1）由图1可知，BamH I和Bgl Ⅱ切割产生的粘*末端相同，用这两种限制酶切割目的基因和质粒后，构建基因表达载体时会出现正向连接和反向连接两种重组质粒，故有50%的细胞能正常表达目的基因产物，剩下部分不能正常表达目的基因产物。由于BamH I和Bgl Ⅱ切割产生的粘*末端连接后，不能被BamH I或Bgl Ⅱ识别切割，只有BamH I切割的粘*末端经过连接后可以被BamH I识别切割，故重组质粒只有1个BamH I识别位点和1个EcoR I识别位点。重组质粒存在正向连接和反向连接两种类型，若用BamH I和EcoR I联合酶切其中一种重组质粒，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段，说明右侧BamH I和EcoR I之间的长度为1.7；用联合酶切同等长度的另一种重组质粒，则切割的是BamH I左侧的位点，又因为manA基因含有1.8kb个碱基对，可获得1.7+1.8=3.5kb和4.9-3.5=1.4kb两种DNA片段。
（2）猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养10代以内的细胞，原因是保持了正常二倍体核型，遗传物质不变。细胞在传至10～50代时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。在核移植时采集的卵母细胞，在体外培养到MⅡ中期（或“减数第二次*中期”）才进行去核*作，因为减数第二次*中期的卵母细胞体积大、易*作，营养物质丰富，细胞质中含有促进细胞核全能*表达的物质。
（3）在早期胚胎培养过程中，应定期更换培养液，清除代谢废物，补充营养物质。胚胎一般培养到桑椹胚或囊胚阶段，可向受体移植。
（4）过程⑤为胚胎移植，胚胎移植前，通常需对受体母猪注*孕激素，使其能同期发情，目的是使供体和受体生殖器官的生理状态相同，为供体的胚胎移入受体提供相同的生理环境。
【点睛】
解答本题的关键是掌握基因工程的相关知识、核移植技术和胚胎移植技术，并能够分析和判断图中各个字母代表的过程的名称，结合题目的提示分析答题。
知识点：基因工程
题型：综合题
